Молекулярдык салмак канчалык чоң болсо, спираль ошончолук узун жана молекула ошончолук жайыраак барат. Ошентип, электрофорез + SDS эне зарядынын негизинде эмес, молекулярдык салмактын негизинде бөлүнөт. Маанилүү эскертүү: бирдей узундуктагы протеиндерди, адатта, гел электрофорез + SDS менен ажыратууга болбойт.
Бир эле молекулалык салмактагы белокторду кантип ажырата аласыз?
Центрифугалоо, электрофорез жана хроматография протеиндерди тазалоонун жана анализдөөнүн эң кеңири таралган ыкмалары. Центрифугалоо белокторду алардын массасы жана формасы таасир эткен чөкүү ылдамдыгына жараша ажыратат.
Кайсы ыкмалар белокторду заряддын негизинде ажыратат?
Белокторду таза зарядынын негизинде ион алмашуу хроматографиясы менен ажыратууга болот. Эгерде протеин рН 7де таза оң зарядга ээ болсо, ал адатта карбоксилат топторун камтыган мончоктордун мамычасына байланышат, ал эми терс заряддуу белок андай болбойт (4.4-сүрөт).
Төмөнкү ыкмалардын кайсынысы протеиндерди молекулярдык салмакка жараша бөлүүгө эң ылайыктуу?
Бөлүүгө негизделген хроматография ыкмалары бөлүү жана майда молекулаларды аминокислоталар, углеводдор жана май кислоталары катары аныктоодо абдан натыйжалуу. Бирок, жакындык хроматографиялары (б.а. ион алмашуу хроматографиясы) макромолекулаларды нуклеиндик кислоталар жана белоктор катары бөлүүдө натыйжалуураак.
Кайсы типтеги тилкехроматография белокторду молекулярдык салмагынын негизинде ажыратат?
Гел фильтрациялоо (GF) хроматография протеиндерди молекулалык чоңдуктун негизинде гана бөлөт. Бөлүнүү стерикалык себептерден улам молекулалар кирүү мүмкүнчүлүгүнүн ар кандай даражасына ээ болгон көзөнөктүү матрица аркылуу ишке ашат, б.а., кичинекей молекулалар көбүрөөк мүмкүнчүлүккө ээ, ал эми чоңураак молекулалар матрицадан чыгарылат.
