Клеткалар ажырап калгандан кийин, трипсинди активдештирүү үчүн алдын ала жылытылган толук өстүрүүчү каражаттын 2 томункошуңуз. >95% клетканын калыбына келишин камсыз кылуу үчүн клетка катмарынын бетине бир нече жолу пипетка менен чөйрөнү акырын таратыңыз.
Трипсиндин активдүүлүгүн кантип токтотом?
Трипсиндин сиңирүүсүн муздатуу же реакциянын рНын рН 4тен ылдый түшүрүү жолу менен формик, уксус же трифторассус кислотасын кошуу менен токтотууга болот (трипсинди сиңирүү активдүүлүгүн калыбына келтиргенде, рН рН 4 жогору көтөрүлөт). Сиңирилген үлгүлөрдү -20°Cде сактоого болот.
Трипсинди эмне нейтралдаштырат?
Кальций жана магний иондорун камтыган буфер да трипсиндин активдүүлүгүн жайлатат. Бирок FBS - трипсиндин активдүүлүгүн бөгөттөөнүн эң натыйжалуу жолу.
Сыворотка трипсинди активдештирбейби?
Сыворотбөйрөктөрдүн ферменттик сиңирүүсүнөн калган трипсиндин калдыктарын жана клеткалар тарабынан синтезделген протеолиттик ферменттерди активдештирбейт. Трипсиндин калдыктарын жок кылуу үчүн кайра-кайра жуулса, жаңы трипсинделген клеткаларды сывороткасыз бир катмарга өстүрсө болот.
Трипсинди деактивациялоо үчүн канча медиа талап кылынат?
Сиз кеминде 1:1 пропорциясында 5-10% сыворотка камтыган чөйрөнү трипсин менен колдонуп жатсаңыз, жетиштүү деңгээлде бөгөт коюу, андан кийин центрифугалоо керек. жана жаңы орто менен алмашуу.
