Биринчиден, EcoR1 да, Xba1 да ДНКны сиңирип жатканда 5' ашыгын калтырышат (Nde1 сыяктуу). Эки учурда тең 3' учу ойгонгон, ошондуктан полиермаза негиздерди кошо алат. Экинчиден, бардык полимеразалар 3' учуна негизди гана кошо алат, ошондуктан Klenow эки сайттын тең чегинген 3' учуна 4 негизди кошот туюк учтарды жаратат.
Ректтеу ферменттери 5 фосфат калтырабы?
Регистрттик ферменттер тарабынан сиңирилген векторлор жана кошумчалар керектүү терминалдык модификацияларды (5' фосфат жана 3' гидроксил) камтыйт, ал эми Полимераздык чынжыр реакциясы (ПТР) тарабынан түзүлгөн фрагменттерде андай болушу мүмкүн эмес.
Токтогон учтарын байласа болобу?
Токтокон учун байламта
Токко учу байлашууда чыгып турган учтардын базалык жупталышы камтылбайт, андыктан каалаган туңгуюк учу башка туңгуюк учу менен байланышы мүмкүн. Учтары SmaI жана EcoRV сыяктуу чектөө ферменттери тарабынан түзүлүшү мүмкүн.
Так полимеразасы туңгуюк учтарды чыгарабы?
Ооба… Так Полимераз А-Ашыкчаларды кошот, эгерде сиз ПТРде 72 dC акыркы кеңейтүү кадамын сактасаңыз. Көбүнчө ТА клондоо үчүн колдонулат.
Эмне үчүн Кленов фрагментин ДНК тизмегинде колдонуш керек?
Кленоу фрагменти төмөнкүдөй изилдөөгө негизделген тапшырмалар үчүн абдан пайдалуу: Бир тилкелүү шаблондордон эки тилкелүү ДНКнын синтези . ДНК фрагменттеринин чегинген 3' учтарын толтуруу, 5' ашыгын тунук кылуу . Чыгып турган 3' ашыгын сиңирүү.
